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蛋白濃縮試劑盒

蛋白濃縮試劑盒

產(chǎn)品編號(hào):RTD9101

產(chǎn)品規(guī)格:50次

數(shù)量
價(jià)格 ¥300

蛋白濃縮試劑盒(目錄號(hào):RTD9101

試劑盒內(nèi)容及保存:


貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貯存

RTD9101-01

試劑A-沉淀溶液

10 ml

RT

RTD9101-03

試劑C-助沉劑

5 ml

RT

RTD9101-04

試劑D-中和液

250 μl

RT

RTD9101-05

1 M NaCl

1 ml

RT

RTD9101-06

1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

1 ml

-20℃

 

說明書

1

 


儲(chǔ)存條件和效期:

試劑盒常溫運(yùn)輸;收到后,按照標(biāo)簽溫度貯存;本試劑盒有效期1年。

產(chǎn)品簡介:

試劑盒原理:在酸性條件下蛋白質(zhì)形成不溶性鹽,使蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致構(gòu)象發(fā)生改變,蛋白暴露出較多的疏水性基團(tuán),蛋白發(fā)生聚集而沉淀。為了避免酸對(duì)后續(xù)電泳的影響,沉淀的蛋白要使用丙酮等洗滌液徹底清洗去除酸。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白樣品處理。

以每次濃縮800 μl蛋白樣品計(jì)算,本試劑盒可以使用40-45次。

操作方法:

1.  準(zhǔn)備1.5 ml干凈的離心管,加入800 μl蛋白樣品溶液。

可選:如果樣品溶液中離子強(qiáng)度低于10 mM,補(bǔ)加8 μl的1M NaCl溶液。低于800 μl的樣品,加入8 μl 1 M NaCl,用水補(bǔ)齊體積至800 μl,使NaCl終濃度為10 mM。

2. 加入蛋白溶液1/10體積的試劑C-助沉劑-80 μl,混勻,常溫靜置15分鐘。

注:加入試劑C后溶液變渾濁。

3.  加入步驟2溶液1/4體積的試劑A -220 μl,渦旋震蕩10-30秒,使之充分混勻。

4.  冰浴放置15分鐘。

5. 4℃,12000 rpm(13000 g)離心10 分鐘。 注:離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。


6.  小心去掉上清液,保留沉淀。

注:請(qǐng)小心操作,可以用移液器輔助徹底吸棄上清。

7.  沉淀中加入600 μl預(yù)冷的丙酮(自備,試劑盒不提供),渦旋震蕩10-30秒,徹底混勻。

   注:丙酮有刺激性氣味,請(qǐng)?jiān)谕L(fēng)櫥內(nèi)操作。

8.  冰浴15分鐘。

9. 4℃,12000 rpm(13000 g) 離心10分鐘;在通風(fēng)櫥中,倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄,沉淀物通風(fēng)晾干30-60秒。注:沉淀不能過分干燥,否則將導(dǎo)致蛋白不好溶解。

10. 蛋白溶解:

根據(jù)下表選擇溶解緩沖液:

下游實(shí)驗(yàn)

溶解緩沖液

 

備注

SDS-PAGE電泳

1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(變性,還原)

試劑盒提供

加入溶解緩沖液后,徹底溶解沉淀(37℃溫浴處理),溶液正常顏色應(yīng)為藍(lán)色;如果溶液為淡綠色或黃色,加入1/10體積中和液D,使顏色變回藍(lán)色。 95℃ 處理5分鐘,電泳上樣

BCA蛋白定量

40mM 碳酸鈉pH11.25

試劑盒不提供

BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度

等電聚焦IEF/2D電泳

7M尿素,2M硫脲,40mM Tris1%C7B2O1% ASB-14 pH10.4

試劑盒不提供

 

酶切實(shí)驗(yàn)

100 mM碳酸氫銨 pH8.5

試劑盒不提供

 

 


實(shí)驗(yàn)示例:



 
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